了解朗伯-比爾定律的應用，掌握鄰二氮菲法測定鐵的原理；了解分光光度計的構造；掌握分光光度計的正確使用方法；學會吸收曲線的繪制和樣品的測定原理。

 鄰菲啰啉是測定微量鐵的較好試劑。在pH＝2～9 的條件下，鄰菲啰啉與Fe²⁺生成穩(wěn)定的橙紅色配合物，其反應式如下：

 

 

                  

Fe³⁺能與領二氮菲生成淡藍色配合物（不穩(wěn)定），故顯色前加入還原劑：鹽酸羥胺使其還原為Fe²⁺。^。

紫外可見分光光度計、鐵標準溶液：含鐵0.01mg/mL、0.1%鄰菲羅啉水溶液、10%鹽酸羥胺水溶液、1mol/lNaAc緩沖溶液（pH4.6）。

 

1．吸收曲線的繪制和測量波長的選擇

 吸取0.0mL和6.0mL 鐵標準溶液分別注入兩個50 mL容量瓶中，依次加入5mlNaAc溶液，2.5ml鹽酸羥胺溶液，5ml鄰菲羅啉溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。用1cm比色皿，以試劑空白為參比，在440~560nm之間，每隔0.5nm測吸光度。然后以波長為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制吸收曲線，找出吸收波長。

2、標準曲線的繪制 

 分別吸取鐵的標準溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于6只50ml容量瓶中，依次分別加入5ml醋酸－醋酸鈉緩沖溶液，2.5ml鹽酸羥胺溶液，5ml鄰菲羅啉溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘，在其吸收波長下，用1cm比色皿，以試劑溶液為空白，測定各溶液的吸光度，以鐵含量(mg/50ml)為橫坐標，溶液相應的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

 

 

 

 

 

 

繪制曲線圖。略