水稻苗中苯丙氨酸解氨酶（PAL）的應(yīng)用方案

引言

苯丙氨酸解氨酶（PAD 對(duì)植物體的木質(zhì)素、植保素、類黃酮、花青素等次生物質(zhì)的形成起重要的調(diào)節(jié)作用，且與植物的抗病作用有一定的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)了解測(cè)定苯丙氨酸解氨酶活性的原理和方法。

關(guān)鍵詞

苯丙氨酸解氨酶、美析紫外

原理

苯丙氨酸解氨酶是植物次生代謝中的一個(gè)關(guān)鍵酶。它催化 L-苯丙氨酸的脫氨反應(yīng). 釋放氨而形成反式肉桂酸。根據(jù)產(chǎn)物反式肉桂酸在波長(zhǎng) 290 nm 處吸光度的變化，可以測(cè)定該酶的活性。

材料與儀器

UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、冷凍高速離心機(jī)，旋渦混合器，恒溫水浴鍋等

材料：黃化水稻幼苗

試劑：0. 1 mol / L硼酸緩沖液（pH 8. 8）；0. 02 mol/ L 1 L-苯丙氨酸：稱取3.33 g/ L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0. 1 mol/L"1 硼酸緩沖液（pH 8. 8）；7 mmol - 統(tǒng)基乙醇硼酸 緩沖液：0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol/L-1 硼酸緩沖液溶解，并定容至 200 mL；聚乙烯毗咯 烷酮（PVP）。

實(shí)驗(yàn)步驟

酶液制備：稱取黃化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 預(yù)冷的提取液（即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸緩沖液）、過(guò)量的聚乙烯毗咯烷酮（PVPX 但不能太多，否則不易研磨）、少量石英 砂在冰浴下研磨成漿，再加 3.5 mL 預(yù)冷的提取液使其終體積為 5 mL。于 12 000 g 4°C 下離心15 min, 用吸管吸取上清液，即粗酶液。

酶活測(cè)定：

反應(yīng)液包括：①0.02 mol - L_1 L-苯丙氨酸 1 mL；

②0.1 mol - L 1 硼酸緩沖液（pH 8. 8）2 mL；

③0.1 mL 粗酶液。

（對(duì)照以 0. 1 mL 疏基乙醇緩沖液代替酶液）

反應(yīng)液用渦旋混合器混勻后立即在 290 nm 處測(cè)起始吸光度值，并精que計(jì)時(shí)。（每一樣品 重復(fù)兩組）將測(cè)定后的各管于 30 °C 水浴保溫 30 min, 再于 290 nm 處測(cè)定各管的吸光度值。 本實(shí)驗(yàn)用UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)以每 30 min 在波長(zhǎng) 290 nm 處吸光度值增加 0. 01 所需酶量為 1 個(gè)單位（U）。

苯丙氨酸解氨酶活性（U - g^-1鮮重）=

式中a 一測(cè)定時(shí)的酶液用量，mL；

V—酶液總體積，mL；

W—樣品重，g。

（苯丙氨酸解氨酶活性也可以 U • mg^-1 蛋白表示. 蛋白質(zhì)含量可用考馬斯亮藍(lán) G-250 法測(cè)定，以牛血清白蛋白作標(biāo)準(zhǔn)）。

關(guān)于美析

美析主營(yíng)光譜類儀器：可見(jiàn)分光光度計(jì)、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、原子吸收光譜儀、原子熒光光度計(jì)、ICP-AES、ICP-MS，生命科學(xué)儀器：超微量分光光度計(jì)、全自動(dòng)核酸提取儀，目，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機(jī)化學(xué)、無(wú)機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等域。同時(shí)美析利用在產(chǎn)品機(jī)械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計(jì)、電氣應(yīng)用和軟件開(kāi)發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合市場(chǎng)的xin實(shí)際需求，近期將陸續(xù)推出一批全xin的分析類儀器。