TTC法根系活力的測定實驗

原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是標準氧化還原電位為80毫伏的氧化還原物質(zhì)。溶于水中為無色溶液，但還原后通過下列反應(yīng)，生成紅色而不溶于水的三苯基甲臢。反應(yīng)式如下：　

生成的甲臜呈穩(wěn)定的紅色，不會被空氣中的氧自動氧化。所以TTC被廣泛地用作酶試驗的受氫體。植物根引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到加強；而被丙二酸、碘乙酸所嚴重抑制。所以，它能夠測定脫氫酶的活性。由該酶活性表示根系活力。

材料與儀器

水培或砂培的玉米或小麥根植物材料（需洗凈）

美析UV-1500PC紫外分光光度計

玉米 小麥根

乙酸乙酯 連二亞硫酸鈉  1%TTC溶液

0.1 M  pH7.5磷酸緩沖液   2N硫酸

 溫箱 研缽 漏斗 移液管 容量瓶

實驗步驟

TTC標準曲線制作：

取0.2  ml  0.5%的TTC溶液加入到10  ml 具塞刻度試管中，再加入少許Na₂S₂O₄粉末，搖勻后即產(chǎn)生紅色的甲臜。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此液0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 ml 至10 ml 具塞刻度試管中，以乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲臜 0.025、0.05、0.10、0.15、0.20毫克的標準比色系列。以空白作參比，在485nm0波長下測定光密度，繪制標準曲線。

定性測定方法

取樣品0.25g放入三角瓶，加入0.5%TTC溶液和0.1 M 磷酸緩沖液（pH7.5）各5  ml 充分混勻，并將根尖完quan浸入在溶液中，至37℃保溫箱內(nèi)1小時，保溫時間一到立即加入2N H2SO4溶液2  ml 以終止反應(yīng)。如根尖顯紅色表明該處具有活躍的脫氫酶存在。

定量測定方法

取出定性顯色的根段，用濾紙吸干外附水分，至研缽中，加乙酸乙酯3－4  ml 研磨。將提取的紅色TTF小心倒入刻度試管中，殘渣用乙酸乙酯沖洗2－3次，直至洗液不帶紅色為止，全部洗液合并于試管中，hou用乙酸乙酯定容至10  ml ；搖勻后，以乙酸乙酯為對照于485n M 下比色，記錄光密度值。查標準曲線，即可求出TTC還原量。

關(guān)于美析

美析主營光譜類儀器：可見分光光度計、紫外可見分光光度計、原子吸收光譜儀、原子熒光光度計、ICP-AES、ICP-MS，生命科學(xué)儀器：超微量分光光度計、全自動核酸提取儀，目，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機化學(xué)、無機化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等域。同時美析利用在產(chǎn)品機械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計、電氣應(yīng)用和軟件開發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗，結(jié)合市場的xin實際需求，近期將陸續(xù)推出一批全xin的分析類儀器。